做標準曲線需要注意的問題

目前國際上最流行的免疫檢測擬合方式是“四參數邏輯擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線關系，從而進一步比較正確的獲得樣品中待測物質的濃度值。

???其實，在一個長的區間內，Logistic應該都能擬合得較為理想。但并不是說它就是的。事實上不僅是ELISA，其它很多生物學反應都是S形曲 線，也都可以用Logistic曲線擬合。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。如果用來定量，S形曲線的中間段（較陡處）是比較好的，而兩端的平 坦部分計算誤差會大，有時甚至會很大。

做標準曲線需要注意：

1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。

2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。

3、最好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。

4、檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。

5、標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。

6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。